Use this url to cite ETD: https://hdl.handle.net/20.500.12259/34827
Options
Citoprotekcinio karščio indukuojamo baltymo hemoksigenazės-1 raiškos pokyčių vertinimas skirtingomis hiperterminės chemoterapijos sąlygomis kasos adenokarcinomos ląstelėse T3M4
Field of Science
Biologija / Biology (N010)
Type of publication
type::text::thesis::master thesis
Title
Citoprotekcinio karščio indukuojamo baltymo hemoksigenazės-1 raiškos pokyčių vertinimas skirtingomis hiperterminės chemoterapijos sąlygomis kasos adenokarcinomos ląstelėse T3M4
Other Title
An Evaluation study of cytoprotective heat induced protein heme oxygenase-1 expression changes in pancreatic adenocarcinoma cells T3M4 under different hyperthermic chemotherapy conditions
Author
Ivanauskienė, Sandra |
Advisor
Dambrauskas, Žilvinas
Extent
61 p.
Date Issued
2017-05-24
Abstract
Kasos vėžys pasižymi bloga prognoze ir vienu didžiausiu mirštamumu iš visų vėžio tipų. Potencialus gydymo būdas yra po chirurginio naviko pašalinimo taikoma hiperterminė intraperitoninė chemoterapija (HIPEC), tačiau trūksta fundamentinių žinių apie hiperterminės chemoterapijos poveikį skirtingoms vėžinėms ląstelėms ir molekulinius mechanizmus. Nustatyta, kad citoprotekcinio karščio indukuojamas baltymas hemoksigenazė-1 (HO-1) atlieka svarbų vaidmenį kancerogenezėje ir rezistencijos mechanizmuose. HO-1 hiperekspresija nustatyta daugelyje vėžinių audinių ir yra dar labiau indukuojama taikant chemoterapinį ar radioterapinį gydymą.
Šio darbo tikslas buvo pritaikyti skirtingas hiperterminės chemoterapijos sąlygas in vitro, ištirti poveikį kasos adenokarcinomos ląstelėms T3M4 ir nustatyti HO-1 raiškos pokyčius. Tyrimo metu ląstelės T3M4 paveiktos skirtinga temperatūra ir cisplatina. Po 48 valandų buvo vertinti T3M4 ląstelių gyvybingumo pokyčiai MTT metodu ir mikroskopu stebėti galimi morfologijos pakitimai. HMOX1 santykinė RNR raiška buvo nustatyta dviejų etapų kiekybine realaus laiko polimerazės grandinine reakcija (kRL-PGR), taikant ΔΔCT santykinės kiekybinės analizės metodą. Taip pat, kokybiškai įvertinta HO-1 baltymo koncentracija Western blot metodu. Tyrimo metu nustatyta, kad hipertermijos poveikis T3M4 ląstelių gyvybingumui ir morfologijai nėra aiškus ir neadityvus cisplatinos poveikiui. Atlikto eksperimento sąlygomis hipertermija neindukuoja HO-1 raiškos. Poveikis cisplatina visose tirtose temperatūrose indukuoja HMOX1 raišką 4, 46 – 7,45 karto ir padidina HO-1 koncentraciją, 37 °C ir 40 °C temperatūra paveiktose T3M4 ląstelėse.
Šio darbo tikslas buvo pritaikyti skirtingas hiperterminės chemoterapijos sąlygas in vitro, ištirti poveikį kasos adenokarcinomos ląstelėms T3M4 ir nustatyti HO-1 raiškos pokyčius. Tyrimo metu ląstelės T3M4 paveiktos skirtinga temperatūra ir cisplatina. Po 48 valandų buvo vertinti T3M4 ląstelių gyvybingumo pokyčiai MTT metodu ir mikroskopu stebėti galimi morfologijos pakitimai. HMOX1 santykinė RNR raiška buvo nustatyta dviejų etapų kiekybine realaus laiko polimerazės grandinine reakcija (kRL-PGR), taikant ΔΔCT santykinės kiekybinės analizės metodą. Taip pat, kokybiškai įvertinta HO-1 baltymo koncentracija Western blot metodu. Tyrimo metu nustatyta, kad hipertermijos poveikis T3M4 ląstelių gyvybingumui ir morfologijai nėra aiškus ir neadityvus cisplatinos poveikiui. Atlikto eksperimento sąlygomis hipertermija neindukuoja HO-1 raiškos. Poveikis cisplatina visose tirtose temperatūrose indukuoja HMOX1 raišką 4, 46 – 7,45 karto ir padidina HO-1 koncentraciją, 37 °C ir 40 °C temperatūra paveiktose T3M4 ląstelėse.
Pancreatic cancer has a very poor prognosis and one of the highest mortality rate of all cancers. Hiperthermic intraperitoneal chemotherapy (HIPEC) is a potential treatment technique for gastrointestinal cancers applied after all visible tumors are surgically removed. However, there is still a lack of fundamental knowledge about the effects of hyperthermic chemotherapy for different cancer cells and molecular mechanisms. The cytoprotective heat induced protein heme oxygenase-1 (HO-1) plays a major role in carcinogenesis and tumor resistance. HO-1 is overexpressed in many cancerous tissues and is further induced after chemotherapic and radiotherapic treatment.
The aim of this study was to apply different hyperthermic chemotherapy conditions in vitro and to evaluate the effect on pancreatic adenocarcinoma cells T3M4 and cytoprotective HO-1 expression. T3M4 cells were treated with different temperatures and cisplatin for one hour. 48 hours later the analysis was carried out. T3M4 cell viability changes were investigated using MTT assay and cell morphology was examined via microscope. HO-1 gene HMOX1 expression analysis was performed with two step qRT-PCR method and ΔΔCT comparative analysis, also HO-1 concentration changes were qualitatively evaluated with Western blot immunoassay. In this study it was determined that the effect of hyperthermia on T3M4 cell viability and morphology is not clear and it has no additive effect for cisplatin cytotoxicity. Under this experiment conditions hyperthermia does not trigger HO-1 expression. The impact of cisplatin in all the investigated temperatures induced HMOX1 expression by 4,46 – 7,45 times in all the temperatures investigated. HO-1 protein concentration was greater in temperatures 37 °C and 40 °C affected by cisplatin.
The aim of this study was to apply different hyperthermic chemotherapy conditions in vitro and to evaluate the effect on pancreatic adenocarcinoma cells T3M4 and cytoprotective HO-1 expression. T3M4 cells were treated with different temperatures and cisplatin for one hour. 48 hours later the analysis was carried out. T3M4 cell viability changes were investigated using MTT assay and cell morphology was examined via microscope. HO-1 gene HMOX1 expression analysis was performed with two step qRT-PCR method and ΔΔCT comparative analysis, also HO-1 concentration changes were qualitatively evaluated with Western blot immunoassay. In this study it was determined that the effect of hyperthermia on T3M4 cell viability and morphology is not clear and it has no additive effect for cisplatin cytotoxicity. Under this experiment conditions hyperthermia does not trigger HO-1 expression. The impact of cisplatin in all the investigated temperatures induced HMOX1 expression by 4,46 – 7,45 times in all the temperatures investigated. HO-1 protein concentration was greater in temperatures 37 °C and 40 °C affected by cisplatin.
Language
Lietuvių / Lithuanian (lt)
Defended
Taip / Yes
Access Rights
Atviroji prieiga / Open Access